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25 Cartas en este set
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¿Qué es la hibridación artificial?
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Unión de ácidos nucleicos monocaternarios en bicaternarios por complementariedad de bases.
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¿Qué es un cultivo in vitro?
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Recuperación de microorganismos a partir del hábitat natural en el que se encuentra a medios artificiales que cubran sus requerimientos artificiales
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¿Qué son las enzimas de restricción?
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Enzimas que catalizan la ruptura de los ácidos nucleicos
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¿Qué es la desnaturalización?
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Proceso de separación de las cadenas de ADN mediante la aplicación de temperatura o álcalis produciendo la ruptura de los puentes de hidrógeno
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¿Qué son las sondas génicas?
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Fragmentos de ADN/ARN marcados con moléculas reporteras como radioisótopos, permite identificar genes 15-30b, obtenidos a partir de síntesis química o plásmidos clonados
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¿para que sirve el southern blot?
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al hibridar fragmentos de ADN separados por electroforesis se puede caracterizar molecularmente a los virus
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¿Que caracteristicas presenta el Northen blot?
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se usa ARN sin enzimas de restricción
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pasos para realizar el southern o Northen blot
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extracción de ADN
digestión con enzimas de restricción electroforesis con gel de agarosa transferencia de membrana de nylon incubar con sonda cADN marcada con 32P exposición a RX |
técnica del dot/slot blot
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el material genético se palica directamente a la membrana son realizar electroforesis
se fija al vacío en molde con porcillo en forma de punto o lineal se realizan detecciones cuantitativas con diluciones |
Técnica del PCR
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se usa Taq polimerasa, se usa ADN, primers, nucleótidos y polimerasa, en un termociclador.
descubierta por Kary Mullis en 1985 |
técnica de hibridación in situ
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fijación del tejido con formalina y parafina, adherencia del tejido al porta, penetración con HCl y proteinasa K, postfijacion con formaldehido e hibridación
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Aplicaciones del PCR
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Clonar un gen de interés
herramienta de construcción plasmidica construcción de genes sintéticos detección de expresión de un gen |
Pasos para realizar una PCR
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Desnaturalización a 95°C
55-65°C unión de cebadores 72° Taq polimerasa agrega los nucleótidos se duplica la secuencia 32-34 ciclos |
que es un primer, cebador o iniciador
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secuencia de ADN de cadena simple para PCR , se conocen como oligonucleótidos
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que es una endonucleasa
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enzimas de restricción que cortan el enlace fosfodiester, pueden ser inhibidas si hay contaminación, presencia de DNAasas o metilación.
Se necesita 10% de buffer |
corte asimétrico, dejando extremos complementarios
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cohesivo
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corte que genera dos extremos de doble cadena
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romo
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que es un esquizomero?
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Enzimas aisladas de diferentes bacterias que tienen la misma secuencia de reconocimiento pero generan productos distintos
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Tipos de ER
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1 y 3 requieren ATP para moverse, cortan regiones distales a la secuencia de restricción
2 corte próximo a la región de restricción, requieren Mg |
cómo se nombra una ER
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se toman las 3 letras del género y especie, otra letra indica el serotipo y el número romano que las identifica
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Usos de las ER
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Resistencia a plaguicidas
factores de crecimiento tratamientos (insulina, anticoagulantes) diagnóstico de enfermedades, forenses y criminología |
que es un vector?
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medios para desplazar ADN a un elemento genético sencillo, pequeño y manipulable, como un plásmido o un virus.
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que es el ADN recombinate?
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moléculas de ADN que contienen ADN de dos procedencias
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tipos de clonación
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génica, reproductiva y terapéutica
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herramientas del ADN recombinante
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ER
ADN ligasa PCR ADN sintético |