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20 Cartas en este set
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Fases del dx molecular
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Obtención DNA - PCR - Electroforesis
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Pasos de obtención del DNA
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Obtención(lisis celular), purificación, cuantificación
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Obtención rapida de DNA
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LISIS TERMICA
Del cultivo lo pones en 50-100microlitros de agua esteril calientas a 95-100•C , centrofugas 30s- 5min y ll almacenas a 4-20 •C |
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Purificación de DNA
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Extracción/precipitación--> fenol/cloroformo
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Componentes de PCR
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Muestra
Buffer 10x MgCl2 a cofactor de adn polimerasa dNTPs -- A, G, C, T Primers Polimerasa H2O |
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Fases de PCR
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1.- 95•C desnaturalización
2.- 50•C alineamiento 3.- 72•C extensión Desnaturalización Alineamiento Extensión |
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Recomendaciones PCR
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No mas de 40 ciclos
Reactivos en frio Materiales consumibles nuevos y esteriles |
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Etapas de electroforesis
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1.- obtención de muestra
2.- preparar gel de agarosa 3.- preparación de muestras con el buffer carga. 4.- carga de las muestras 5.- corrida del gel 6.- teñido del gel 7.- visualizar gel con luz uv |
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Electroforesis voltaje aplicado
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Velocidad de migracion es proporcional al voltaje aplicado
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Gold standar del disgnostico molecular
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Electroforesis
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Desventajas de PCR
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Iniciadores especificos
Limitaciones del tamaño a amplificar Errores de replicacion Que se contaminen Costoso |
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Tecnicas derivadas de PCR
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Semianidada
Transcriptasa reversa Múltiple RFLP Tiempo Real Secuenciación |
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PCR semi-anidada
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Dos rondas de amplificación con dif primers para mas especificidad
•1era- primers externos- secuencia extensa •2da- primers internas- región especifica |
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PCR semi-anidada
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Dos rondas de amplificación con dif primers para mas especificidad
•1era- primers externos- secuencia extensa •2da- primers internas- región especifica |
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Polimorfismos de Longitud de Fragmentos de Restricción (RFLP)
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Variación en la secuencia de ADN
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PCR multiple
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Amplificacion de varias secuencias de forma simultanea
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PCR tiempo real
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•Al tiempo que amplifica cuantifica el producto de amolificacion
• Es un PCR pero con fluoróforo •Rapido diagnostico |
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PCR transcriptasa reversa
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A partir de cDNA de RNA
2 enzimas: transcriptasa reversa termolábil y DNA polimerasa termoestable |
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Secuenciacion
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Identificar segmentos cortos de DNA dividiendo fragmentos pequeños
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Gene Xpert
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Solo detecta a mycobacterium tuberculosis y resistencia a rifampicina
NO DETECTA MYCOBACTERIAS ATIPICAS |
