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¿Cuál es la doble naturaleza de la luz?
Corpuscular
Ondulatoria
¿Qué estableció Luis Broglie?
Todo corpúsculo lleva asociado una onda y que la intensidad de una onda en un punto, en cierto instante, es la probabilidad de que el corpúsculo asociado esté en ese punto en el instante considerado
¿Por qué se forma la luz?
Por saltos de electrones en los orbitales de los átomos.
Algunos saltos producen radiación visible que denominamos luz
Objetos visibles
El proceso por el cual un rayo de luz incide sobre una superficie rebota sobre ella; el color de los objetos dependerá de su absorción y del espectro de la luz incida sobre ellos
¿Por qué esta constituido el espectro electromagnético?
Ondas de radio
Microondas
Luz infrarroja, visible y ultravioleta
Rayos x
Rayos gamma
Absorción de la radiación
Cuando la radiación pasa a través de una capa transparente de un sólido, líquido o gas, ciertas frecuencias pueden ser selectivamente removidas a través de un proceso de absorción
¿Cuáles son los tipos de energía interna dentro de una molécula?
Energía traslacional. Esta se debe al movimiento que tiene la molécula en virtud de su cambio de posición e el espacio
Energía rotacional. Se debe al movimiento o giro de la molécula a través de un eje imaginario que pasa por su centro de gravedad
Energía vibracional.
Energía electrónica. Existe en virtud de la energía potencial del sistema
Espectroscopía
Estudio de la interacción entre la radiación electromagnética y la materia, como absorción y emisión de energía radiante.
Análisis espectral
Se basa en detectar la absorción o emisión de radiación electromagnética a ciertas longitudes de onda
Se utiliza para obtener información de la muestra
Tipos de espectroscopía
De emisión. Requiere métodos en los cuales el estímulo es de calor o energía eléctrica
De quimioluminiscencia. Se refiere a la estimulación del analíto por una reacción química
En la estimulación de la mezcla mediante radiación electromagnética ¿Cuales son los procesos de la radiación?
Se puede reflejar, difundir o absorber
Espectroscopía de absorción
Se mide la cantidad de luz absorbida en función a la longitud de onda
Espectroscopía de fotoluminiscecia
La emisión de fotones se mide después de la absorción. Las formas más importantes de fotoluminiscencia para fines analíticos son la fluorescencia y la espectroscopia de fosforecencia.
Difusión de la radiación elástica
la difusión de longitud de onda de la radiación es igual es igual a la de la fuente de radiación. (Se puede utilizar para mediciones en nefelometría y turbidimetría)
Difusión inelástica
La espectroscopia raman aprovecha la difusión inelástica para producir un espectro vibracional de las moléculas de la muestra. Aquí la intensidad de los picos raman se relaciona con la concentración del analito.
Métodos ópticos de análisis químico
Aquellos que miden la radiación electromagnética que emana o interactúa con la materia
Tienen como objetivo, la medida de la radiación que es emitida, absorbida, o transmitida al interactuar el campo eléctrico de la radiación con los campos eléctricos de la materia
Métodos espectroscópicos
miden la radiación absorbida por átomos, moléculas o iones y se conocen como métodos espectroscópicos de absorción, y según sea la radiación absorbida, se conocen como métodos de absorción de rayos X, absorción en el ultravioleta, absorción en el visible, absorción infrarroja, etc.
Métodos no espectroscópicos
miden cambios en la dirección de la propagación de la luz, entre ellos se tienen la refractometría, polarimetría, medidas de reflectancia entre otros.
Métodos espectroscópicos según la naturaleza de la exitación de la medida
Electromagnética. Interacciones de la materia con radiación electromagnética como la luz.
De electrones. Interacciones con haces de electrones. La espectroscopia auger implica inducir el efecto auger con un haz de electrones. En este caso la medida implica la energía cinética del electrón como variable.
De masa. Interacción de especies cargadas con campos magnéticos y/o eléctricos, dando lugar a un espectro de masas. Este espectro tiene la masa (m) como variable, pero la medida es esencialmente de la energía cinética de la partícula.
Acústica. Frecuencia de sonido.
Dieléctrica. Frecuencia de un campo eléctrico externo.
Mecánica. Frecuencia de un estrés mecánico externo, por ejemplo una torsión aplicada a un trozo de material.
Métodos no espectroscópicos
Espectrofotometría. Mide cuánta luz absorbe una sustancia química, midiendo la intensidad de la luz cuando un haz luminoso pasa a través de la solución muestra, basándose en la Ley de Beer-Lambert.
Principio de la espectrofotometría
Se aprovecha la absorción de radiación electromagnética en la zona del ultravioleta y visible del espectro. La muestra absorbe parte de la radiación incidente en este espectro y promueve la transición del analito hacia un estado excitado, transmitiendo un haz de menor energía radiante.
Ley de lambert-beer
afirma que la cantidad de luz absorbida por un cuerpo depende de la concentración en la solución.
Colorimetría
ciencia encargada de medir los colores para obtener la cuantificación de los mismos, favoreciendo así su estandarización.
Colorímetro
Las sustancias químicas absorben diferentes frecuencias de luz, por lo que el colorímetro basa sus funciones en la ley de absorción comúnmente conocida como ¨Lambert-Beer¨
Refractometría
método óptico que determina la velocidad de propagación de la luz en un medio contra la velocidad de la luz en el vacío, usando la unidad de Indice de Refracción, lo cual se relaciona directamente con la densidad de este medio.
Apertura en óptica
Agujero o perforación a través de la cual pasa la luz. Determina el ángulo del cono de un haz de rayos que se enfoca en el plano de imagen.
Ajuste del diafragma más "óptimo".
.2/3 o .4/5
función de la iluminación de Kölher
iluminar un espécimen con un campo uniforme de luz que sea del mismo diámetro que el área de captura del objetivo
Funcionamiento Iluminación de Köhler
Una imagen del campo diafragma se enfoca por el lente condensador sobre el plano del espécimen, iluminando de esta manera con un cono sólido de luz homogénea
Atributos básicos de los colores
Matiz
Luminosidad
Saturación
Tipos de imágenes
Imagen real
Imagen virtual
Imagen real
Formada sobre los propios rayos. Se puede recoger sobre una pantalla.
Imagen virtual
Formada por la prolongación de los rayos. no se puede recoger en pantalla.
Lente
Es un medio transparente y homogéneo, limitado por dos superficies, una de ellas por lo menos, curva. Al ser atravesados por un rayo luminoso, éste se refracta.
Clases de lentes
Convergentes
Divergentes
Convergentes
Son de mayor espesor en el centro que en los bordes.
Divergentes
Son más delgadas en el centro que en los bordes.
Elementos de una lente
Centros de curvatura
Eje principal
Centro óptico
Foco
Distancia focal
Centros de curvatura
centros geométricos de las superficies curvas que limitan el medio transparente
Eje principal
la línea imaginaria que une los centros de curvatura
Foco
punto del eje principal por dónde pasan los rayos refractados en la lente
Distancia focal
es la distancia entre el foco y el centro óptico
Centro óptico
Es el punto de intersección de la lente con el eje principal.
Propiedades de la construcción de imágenes
1.Todo rayo paralelo al eje principal, se refracta pasando por el foco.
2.Todo rayo que pasa por el centro óptico, no se desvía.
3. Todo rayo que pasa por el foco, se refracta paralelo al eje principal.
Siendo:
Potencia de una lente
Número inverso de la distancia focal. A menor distancia focal, mayor potencia.
Límite de resoulución de un microscopio
habilidad de distinguir dos discos de Airy cercanos entre sí
Microscopio de contraste de fase
aprovecha las pequeñas diferencias de los índices de refracción en las distintas partes de una célula y en distintas partes de una muestra de tejido
Usos microscopio contraste de fase
observar células sin colorear y resulta especialmente útil para células vivas.
Partes de la imagen del microscopio de contraste de fase
Oscuras: Partes densas
Claras: Partes menos densas
Formas de discos de fase
Positivos
Negativos
Funcionamiento del microscopio fluorescente
A una sustancia natural de la célula o un colorante especial, se le aplica un haz de luz. Ésta emite parte de la energía recibida como rayos luminosos.
Flourocromos
Pueden usarse directamente, aprovechando la propiedad de unirse a determinadas moléculas u orgánulos. Pero lo más habitual es que estos colorantes se empleen conjugados a otras moléculas
Flourescencia
Las moléculas excitadas regresan a su estado normal liberan el exceso de energía en forma de luz visible de mayor longitud de onda que la radiación excitante. aparecen brillantemente iluminados contra un fondo oscuro.
Constitución fundamental micro fluorescente
Fuente luminosa :Debe emitir la mayor cantidad de luz ultravioleta en el límite del espectro visible.
Objetivos: Suelen ser de cuarzo ya que el vidrio absorbe la radiación ultra-violeta.
Filtros: Retienen la radiación ultra-violeta, peligrosa para el ojo humano, dejando pasar solamente la radiación visible, que no es peligrosa.
Microscopio confocal.
Funcionamiento similar al de fluorescencia.
Ventaja: permite obtener imágenes de mayor calidad mediante técnicas de filtrado espacial, elimina luz fuera de foco.
Fuente luz micro confocal.
un láser que ilumina el preparado a diferentes alturas, generando secciones ópticas.
PINHOLE
Componentes fundamental del micro confocal, filtra la luz proveniente de planos fuera del foco.
Micro Electrónico de Barrido (M E B)
Utiliza un haz de electrones en lugar de un haz de luz para formar una imagen ampliada de la superficie del objeto.
Funcionamiento del M E B
Consiste en hacer incidir un barrido de haz de electrones sobre la muestra.
La muestra esta generalmente recubierta por una capa fina de oro o carbón.
Partículas formadas por el haz de electrones al llegar a la superficie de la muestra (M E B)
Electrones retrodispersados
Electrones secundarios
Rayos x
Detectores del M E B
Detector de electrones secundarios.
Detector de electrones retrodispersados.
Detector de energía dispersiva.
Micro Electrónico de Transmisión (M E T)
Es un microscopio que utiliza un haz de electrones para visualizar un objeto. Lo característico de este microscopio es el uso de una muestra ultra fina y que la imagen se obtenga de los electrones que atraviesan la muestra.
Estructura del M E T
•Cañón de electrones
•Lentes magnéticas: crean campos que dirigen y enfocan el haz de electrones.
•Sistema de vacío: Debido a que los electrones pueden ser desviados por las moléculas del aire, tiene que existir vacío.
Estrucutra M E T pt 2
•Placa fotográfica o pantalla fluorescente: se coloca detrás del objeto a visualizar para registrar la imagen aumentada.
•Sistema de registro: muestra la imagen que producen los electrones, que suele ser un ordenador
Funcionamiento M E T
Emite un haz de electrones dirigido hacia el objeto que se desea aumentar. Una parte de los electrones rebotan o son absorbidos por el objeto y otros lo atraviesan formando una imagen aumentada de la muestra
Uso M E T
Cortar muestra en capas finas no mayores a miles de amstrongs. El M E T puede aumentar un objeto hasta un millón de veces.