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¿Cuál es la doble naturaleza de la luz?
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Corpuscular
Ondulatoria |
¿Qué estableció Luis Broglie?
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Todo corpúsculo lleva asociado una onda y que la intensidad de una onda en un punto, en cierto instante, es la probabilidad de que el corpúsculo asociado esté en ese punto en el instante considerado
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¿Por qué se forma la luz?
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Por saltos de electrones en los orbitales de los átomos.
Algunos saltos producen radiación visible que denominamos luz |
Objetos visibles
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El proceso por el cual un rayo de luz incide sobre una superficie rebota sobre ella; el color de los objetos dependerá de su absorción y del espectro de la luz incida sobre ellos
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¿Por qué esta constituido el espectro electromagnético?
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Ondas de radio
Microondas Luz infrarroja, visible y ultravioleta Rayos x Rayos gamma |
Absorción de la radiación
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Cuando la radiación pasa a través de una capa transparente de un sólido, líquido o gas, ciertas frecuencias pueden ser selectivamente removidas a través de un proceso de absorción
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¿Cuáles son los tipos de energía interna dentro de una molécula?
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Energía traslacional. Esta se debe al movimiento que tiene la molécula en virtud de su cambio de posición e el espacio
Energía rotacional. Se debe al movimiento o giro de la molécula a través de un eje imaginario que pasa por su centro de gravedad Energía vibracional. Energía electrónica. Existe en virtud de la energía potencial del sistema |
Espectroscopía
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Estudio de la interacción entre la radiación electromagnética y la materia, como absorción y emisión de energía radiante.
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Análisis espectral
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Se basa en detectar la absorción o emisión de radiación electromagnética a ciertas longitudes de onda
Se utiliza para obtener información de la muestra |
Tipos de espectroscopía
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De emisión. Requiere métodos en los cuales el estímulo es de calor o energía eléctrica
De quimioluminiscencia. Se refiere a la estimulación del analíto por una reacción química |
En la estimulación de la mezcla mediante radiación electromagnética ¿Cuales son los procesos de la radiación?
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Se puede reflejar, difundir o absorber
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Espectroscopía de absorción
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Se mide la cantidad de luz absorbida en función a la longitud de onda
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Espectroscopía de fotoluminiscecia
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La emisión de fotones se mide después de la absorción. Las formas más importantes de fotoluminiscencia para fines analíticos son la fluorescencia y la espectroscopia de fosforecencia.
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Difusión de la radiación elástica
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la difusión de longitud de onda de la radiación es igual es igual a la de la fuente de radiación. (Se puede utilizar para mediciones en nefelometría y turbidimetría)
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Difusión inelástica
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La espectroscopia raman aprovecha la difusión inelástica para producir un espectro vibracional de las moléculas de la muestra. Aquí la intensidad de los picos raman se relaciona con la concentración del analito.
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Métodos ópticos de análisis químico
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Aquellos que miden la radiación electromagnética que emana o interactúa con la materia
Tienen como objetivo, la medida de la radiación que es emitida, absorbida, o transmitida al interactuar el campo eléctrico de la radiación con los campos eléctricos de la materia |
Métodos espectroscópicos
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miden la radiación absorbida por átomos, moléculas o iones y se conocen como métodos espectroscópicos de absorción, y según sea la radiación absorbida, se conocen como métodos de absorción de rayos X, absorción en el ultravioleta, absorción en el visible, absorción infrarroja, etc.
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Métodos no espectroscópicos
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miden cambios en la dirección de la propagación de la luz, entre ellos se tienen la refractometría, polarimetría, medidas de reflectancia entre otros.
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Métodos espectroscópicos según la naturaleza de la exitación de la medida
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Electromagnética. Interacciones de la materia con radiación electromagnética como la luz.
De electrones. Interacciones con haces de electrones. La espectroscopia auger implica inducir el efecto auger con un haz de electrones. En este caso la medida implica la energía cinética del electrón como variable. De masa. Interacción de especies cargadas con campos magnéticos y/o eléctricos, dando lugar a un espectro de masas. Este espectro tiene la masa (m) como variable, pero la medida es esencialmente de la energía cinética de la partícula. Acústica. Frecuencia de sonido. Dieléctrica. Frecuencia de un campo eléctrico externo. Mecánica. Frecuencia de un estrés mecánico externo, por ejemplo una torsión aplicada a un trozo de material. |
Métodos no espectroscópicos
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Espectrofotometría. Mide cuánta luz absorbe una sustancia química, midiendo la intensidad de la luz cuando un haz luminoso pasa a través de la solución muestra, basándose en la Ley de Beer-Lambert.
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Principio de la espectrofotometría
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Se aprovecha la absorción de radiación electromagnética en la zona del ultravioleta y visible del espectro. La muestra absorbe parte de la radiación incidente en este espectro y promueve la transición del analito hacia un estado excitado, transmitiendo un haz de menor energía radiante.
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Ley de lambert-beer
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afirma que la cantidad de luz absorbida por un cuerpo depende de la concentración en la solución.
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Colorimetría
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ciencia encargada de medir los colores para obtener la cuantificación de los mismos, favoreciendo así su estandarización.
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Colorímetro
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Las sustancias químicas absorben diferentes frecuencias de luz, por lo que el colorímetro basa sus funciones en la ley de absorción comúnmente conocida como ¨Lambert-Beer¨
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Refractometría
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método óptico que determina la velocidad de propagación de la luz en un medio contra la velocidad de la luz en el vacío, usando la unidad de Indice de Refracción, lo cual se relaciona directamente con la densidad de este medio.
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Apertura en óptica
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Agujero o perforación a través de la cual pasa la luz. Determina el ángulo del cono de un haz de rayos que se enfoca en el plano de imagen.
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Ajuste del diafragma más "óptimo".
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.2/3 o .4/5
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función de la iluminación de Kölher
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iluminar un espécimen con un campo uniforme de luz que sea del mismo diámetro que el área de captura del objetivo
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Funcionamiento Iluminación de Köhler
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Una imagen del campo diafragma se enfoca por el lente condensador sobre el plano del espécimen, iluminando de esta manera con un cono sólido de luz homogénea
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Atributos básicos de los colores
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Matiz
Luminosidad Saturación |
Tipos de imágenes
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Imagen real
Imagen virtual |
Imagen real
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Formada sobre los propios rayos. Se puede recoger sobre una pantalla.
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Imagen virtual
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Formada por la prolongación de los rayos. no se puede recoger en pantalla.
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Lente
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Es un medio transparente y homogéneo, limitado por dos superficies, una de ellas por lo menos, curva. Al ser atravesados por un rayo luminoso, éste se refracta.
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Clases de lentes
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Convergentes
Divergentes |
Convergentes
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Son de mayor espesor en el centro que en los bordes.
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Divergentes
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Son más delgadas en el centro que en los bordes.
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Elementos de una lente
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Centros de curvatura
Eje principal Centro óptico Foco Distancia focal |
Centros de curvatura
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centros geométricos de las superficies curvas que limitan el medio transparente
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Eje principal
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la línea imaginaria que une los centros de curvatura
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Foco
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punto del eje principal por dónde pasan los rayos refractados en la lente
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Distancia focal
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es la distancia entre el foco y el centro óptico
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Centro óptico
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Es el punto de intersección de la lente con el eje principal.
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Propiedades de la construcción de imágenes
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1.Todo rayo paralelo al eje principal, se refracta pasando por el foco.
2.Todo rayo que pasa por el centro óptico, no se desvía. 3. Todo rayo que pasa por el foco, se refracta paralelo al eje principal. Siendo: |
Potencia de una lente
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Número inverso de la distancia focal. A menor distancia focal, mayor potencia.
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Límite de resoulución de un microscopio
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habilidad de distinguir dos discos de Airy cercanos entre sí
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Microscopio de contraste de fase
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aprovecha las pequeñas diferencias de los índices de refracción en las distintas partes de una célula y en distintas partes de una muestra de tejido
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Usos microscopio contraste de fase
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observar células sin colorear y resulta especialmente útil para células vivas.
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Partes de la imagen del microscopio de contraste de fase
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Oscuras: Partes densas
Claras: Partes menos densas |
Formas de discos de fase
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Positivos
Negativos |
Funcionamiento del microscopio fluorescente
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A una sustancia natural de la célula o un colorante especial, se le aplica un haz de luz. Ésta emite parte de la energía recibida como rayos luminosos.
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Flourocromos
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Pueden usarse directamente, aprovechando la propiedad de unirse a determinadas moléculas u orgánulos. Pero lo más habitual es que estos colorantes se empleen conjugados a otras moléculas
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Flourescencia
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Las moléculas excitadas regresan a su estado normal liberan el exceso de energía en forma de luz visible de mayor longitud de onda que la radiación excitante. aparecen brillantemente iluminados contra un fondo oscuro.
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Constitución fundamental micro fluorescente
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Fuente luminosa :Debe emitir la mayor cantidad de luz ultravioleta en el límite del espectro visible.
Objetivos: Suelen ser de cuarzo ya que el vidrio absorbe la radiación ultra-violeta. Filtros: Retienen la radiación ultra-violeta, peligrosa para el ojo humano, dejando pasar solamente la radiación visible, que no es peligrosa. |
Microscopio confocal.
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Funcionamiento similar al de fluorescencia.
Ventaja: permite obtener imágenes de mayor calidad mediante técnicas de filtrado espacial, elimina luz fuera de foco. |
Fuente luz micro confocal.
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un láser que ilumina el preparado a diferentes alturas, generando secciones ópticas.
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PINHOLE
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Componentes fundamental del micro confocal, filtra la luz proveniente de planos fuera del foco.
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Micro Electrónico de Barrido (M E B)
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Utiliza un haz de electrones en lugar de un haz de luz para formar una imagen ampliada de la superficie del objeto.
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Funcionamiento del M E B
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Consiste en hacer incidir un barrido de haz de electrones sobre la muestra.
La muestra esta generalmente recubierta por una capa fina de oro o carbón. |
Partículas formadas por el haz de electrones al llegar a la superficie de la muestra (M E B)
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Electrones retrodispersados
Electrones secundarios Rayos x |
Detectores del M E B
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Detector de electrones secundarios.
Detector de electrones retrodispersados. Detector de energía dispersiva. |
Micro Electrónico de Transmisión (M E T)
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Es un microscopio que utiliza un haz de electrones para visualizar un objeto. Lo característico de este microscopio es el uso de una muestra ultra fina y que la imagen se obtenga de los electrones que atraviesan la muestra.
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Estructura del M E T
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•Cañón de electrones
•Lentes magnéticas: crean campos que dirigen y enfocan el haz de electrones. •Sistema de vacío: Debido a que los electrones pueden ser desviados por las moléculas del aire, tiene que existir vacío. |
Estrucutra M E T pt 2
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•Placa fotográfica o pantalla fluorescente: se coloca detrás del objeto a visualizar para registrar la imagen aumentada.
•Sistema de registro: muestra la imagen que producen los electrones, que suele ser un ordenador |
Funcionamiento M E T
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Emite un haz de electrones dirigido hacia el objeto que se desea aumentar. Una parte de los electrones rebotan o son absorbidos por el objeto y otros lo atraviesan formando una imagen aumentada de la muestra
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Uso M E T
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Cortar muestra en capas finas no mayores a miles de amstrongs. El M E T puede aumentar un objeto hasta un millón de veces.
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Refractómetro y usos
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Es un instrumento óptico preciso, basa su funcionamiento en el estudio de la refracción de la luz.
Identificar una sustancia. Verificar su grado de pureza. Analizar el porcentaje de soluto disuelto en una determinada solución. Ofrecer otros análisis cualitativos. |
Funcionamiento del refractómetro
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Su funcionamiento se basa en utilizar la refracción de la luz, la cual es una propiedad física de cualquier sustancia y se relaciona con algunas propiedades físicas como la densidad.
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Polarimetría
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Es una técnica que se basa en la medición de la rotación óptica producida sobre un haz de luz polarizada al pasar por una sustancia ópticamente activa.
La actividad óptica rotatoria de una sustancia, tiene su origen en la asimetría estructural de las moléculas. Es una técnica no destructiva Medir la actividad (rotación) óptica de compuestos tanto orgánicos como inorgánicos. |
¿Cuándo es un compuesto considerado ópticamente activo?
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si la luz linealmente polarizada sufre una rotación cuando pasa a través de una muestra de dicho compuesto.
La rotación óptica viene determinada por la estructura molecular y la concentración de moléculas quirales. |
Rotación
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es una función lineal de la concentración tanto de la sustancia examinada como de la longitud de la vía de la solución (= longitud del tubo).
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Rotación específica
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es una rotación angular obtenida en condiciones de medición estándar: concentración, longitud del tubo, temperatura y longitud de onda.
Referencia: la longitud de onda del sodio, de 589 nm. característica única de una sustancia química puede ser cualquier ángulo (sup. 90°) |
Intervalo angular: ambigüedad
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Los polarímetros sólo pueden detectar la posición del PLANO de luz antes de entrar en la muestra y después de transmitirla a través de la muestra. La diferencia angular (= rotación) puede proporcionar un resultado ambiguo porque una rotación positiva.
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Ley de Snell
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Establece una relación entre el indice de refracción de cada medio con el angulo de corrimiento respecto de la normal.
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Refracción molecular
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Es una propiedad aditiva y constitutiva de la materia, se define por la ecuación de lorentz.
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Polarización de la luz
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Las ondas luminosas no suelen estar polarizadas, de forma que la vibración electromagnética se produce en todos los planos. La luz que vibra en un solo plano se llama luz polarizada
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Polarización lineal
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es un confinamiento del vector del campo eléctrico o vector del campo magnético a un plano dado a lo largo de la dirección de propagación.
La orientación de una onda electromagnética polarizada linealmente se define por la dirección del campo eléctrico vectorial. |
Polarización circular
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Dos ondas iguales pero una viaja de un lado al otro y otra de arriba abajo. La distancia entre los puntos mas altos son de 90 grados, por lo que, al viajar en el tiempo forman un circulo.
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Polarización elíptica
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Ondas iguales pero sus puntos mas altos pueden estar a cualquier distancia por lo que la figura que describen será una elipse
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Asimetría molecular
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Las moléculas orgánicas asimétricas (moléculas quirales) tienen la capacidad de generar actividad óptica. Dicha actividad radica en la presencia de uno o más carbonos asimétricos en la molécula.
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Variables que afectan la rotación específica
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El número de grados que el plano de polarización gira a medida que pasa a través de una solución depende del número de moléculas de soluto que encuentra a su paso, es decir, de la concentración del mismo.
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Dispersión óptica rotatoria
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La dispersión rotatoria óptica consiste en la variación de la rotación específica en función de la longitud de onda de la radiación incidente sobre una muestra.
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Dicroísmo circular
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Un material presenta dicroísmo circular cuando la absorción de la luz circularmente polarizada en una dirección es diferente de la luz circularmente polarizada en la dirección opuesta.Cuando la luz se polariza circularmente, surge un componente secundario de absorbancia, el cual se mide como el cambio entre la luz polarizada circularmente a la derecha e izquierda y la diferencia resultante se expresa como absorbancia.
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Sistemas del microscopio óptico
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Mecánico
Óptico Iluminación |
Turbidimetría
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Es la medición de la luz transmitida a través de una suspensión de partículas. Es decir, es la medición de la luz que no se ha dispersado
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Nefelometría
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Mide la luz dispersada en dirección distinta a la luz emitida.
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Diferencias entre nefelometría y turbidimetría
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La mejor elección cuando la muestra contiene pocas partículas dispersantes es la nefelometría. La turbidimetría es buena cuando las muestras contienen grandes concentraciones de partículas dispersantes.
Tamaño de las partículas dispersantes. En la nefelometría la intensidad de la radiación dispersada a 90º es mayor si las partículas son bastante pequeñas para que se produzca una dispersión Rayleigh. Si las partículas son mayores la intensidad de la dispersión disminuirá. |
Partes del turbidímetro
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Fuente: Lámparas de wolframio, tungsteno y xenón, puesto que se ha demostrado que la luz blanca es la que mejor se dispersa.
Sistema óptico y Monocromador: Generalmente por lentes convergentes para colimar el haz que va a la muestra. Primas, red de difracción o filtros. Celdas: Los recipientes son de vidrio o de plástico, rectangulares con dos paredes que tienen un recubrimiento ***** mate para eliminar el reflejo de radiación extraña al detector. Detector: Cualquiera de los utilizados en la región de la luz visible, en especial los diodos de silicio. Sistema de registro: Los múltiples modelos usan sistemas de lecturas de agujas reflectadas, pantallas digitalizadas y hasta micro procesadores de señales. |
Nefelómetro
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Fuente: El generador de señales para las medidas nefelométricas es la lámpara de xenón ya que emite luz blanca.
Monocromador: Pueden ser filtros interferenciales o redes de difracción como los utilizados en la región visible. Celdas: Tienen las mismas características que las utilizadas en fluorescencia, es decir, vidrio común en visible y de cuarzo en uv. Detector: Se utilizan fotomultiplicadores o diodos de silicio. Sistema de registro: Agujas, pantallas, etc. |
Usos del nefelómetro y el turbidímetro
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Se utilizan normalmente en el análisis de la calidad química del agua, para determinar la claridad y para el control de los procesos de tratamiento. También para la determinación de iones sulfato.
Se utiliza para el análisis de fibrinógeno, triglicéridos, complejos Ag-Ac y otras sustancias. (Turbidimetría). Se suele utilizar para medir concentraciones específicas de colonias de bacterias en algún medio de cultivo. (Nefelometría) |
Fotometría de reflectancia difusa
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Ciencia que se encarga de la medida de la luz. Como el brillo percibido por el ojo humano. Es decir, estudia la capacidad que tiene la radiación electromagnética de estimular el sistema visual.
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Reflexión difusa
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La reflexión difusa que se produce en superficies rugosas o no tan pulidas en la cual el Angulo de haz incidente va a ser diferente al haz del reflejado. Forma como una semiesfera.
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Fotómetro
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El fotómetro es un equipo de laboratorio que se usa para medir la intensidad de la luz. En términos generales sirve para medir lo siguiente:
Intensidad de luz dispersa Absorbancia Fluorescencia |
Fotómetros para análisis de agua
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Es capaz de medir los parámetros más importantes en la medida de la calidad de las aguas.
La medición con el fotómetro deberá realizarse siempre en un lugar oscuro para que los fotómetros puedan determinar la cantidad correcta de luz incidente y no se vea influenciado por el sol. |
Sistemas del microscopio óptico
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Mecánico
Óptico Iluminación |
Fundamento del microscopio óptico
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usan lentes, para enfocar y amplificar los rayos de luz que pasan a través de un espécimen o rebotan en él.
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Componentes básicos
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Platina, revolver, objetivos, las pinzas, todas esas mmdas
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