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Caracterísiticas teoría de platos
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•cuenta la forma de los picos y velocidad de movimiento.
•no cuenta el ensanchamiento de la banda. •no indica efectos en otros parámetros. •no indica cómo ajustar parámetros experimentales. |
¿Qué considera la teoría cinética?
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el ensanchamiento de las bandas por transferencia de masa durante el desplazamiento de una especie a lo largo de la columna.
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Factores teoría cinética
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•Difusión por turbulencia y trayectorias seguidas por la fase móvil. (A).
•Difusión longitudinal del soluto a lo largo de la columna. (B). •Equilibrio del soluto entre las fases móvil y estacionaria no suficientemente rápida. (C) . |
Columnas capilares
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Tubos de gran longitud y diámetro pequeño en cuya superficie interna se fija a la fase estacionaria líquida, y se enrolla helicoidalmente en el interior del horno termostatizado
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Tipos de columnas capilares
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•pared revestida (WCOT)
•revestidas con soporte (SCOT) |
Factores que disminuyen la eficacia de la columna
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•longitud de la columna: limita las velocidades del gas.
•diámetro: resistencia que opone la fase móvil. •tamaño de la partícula de relleno. •temperatura columna. •cantidad de muestra. |
Absorbentes utilizados en cromatografía plana
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Gel de silice (SiO2)
Gel de alumina (Al2O3) |
¿A qué se debe la absorción en cromatografía plana?
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A las interacciones intermoleculares (dipolo-dipolo o puentes de hidrógeno). El absorbente debe ser inerte con las sustancias.
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¿Para que se utiliza la cromatografía de gases y cómo lo hace?
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analizar sustancias volátiles en su fase gaseosa. Los componentes son divididos en un solvente y posteriormente vaporizados.
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¿Cómo se clasifica la cromato de gases?
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Por su fase estacionaria, que puede ser un sólida (GSC) o Líquida (GLC)
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Gases más usados en GLC para fase móvil y características
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Helio, hidrógeno, argón y nitrógeno.
debe ser inerte, seco y libre de oxígeno |
Partes cromato de gases
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Inyector, Horno, Columna, detector y registrador.
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Aplicaciones cromato de gases y que mide
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farmaceútica, cosmética y detección de toxinas. Mide presencia, pero no las representa cuantitativamente, sólo en proporción.
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¿En qué se basa la separación de la muestra en cromato de líquidos?
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Se basa en las interacciones de la muestra con la fase móvil o estacionaria. Los componentes se separan basados en la afinidad de cada componente.
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Fase móvil cromato de líquidos
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La composición se cambia para alterar las interacciones de los compuestos. El efluente es recolectado mientras se monitorean las concentraciones de los compuestos.
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Fase estacionaria cromato de líquidos
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Las especies individuales quedan retenidas en función de las interacciones que suceden como lo son: adsorción superficial, solubilidad y carga
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Cromatografía de fase normal
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fase móvil no polar y la fase estacionaria es polar (gel de sílice)
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Cromatografía de fase invertida
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fase móvil de naturaleza polar y fase la estacionaria no polar (cadena hidrocarbonada)
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Cromatografía de intercambio iónico
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Método que permite la separación de moléculas basada en sus propiedades de carga eléctrica.
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Principio cromatografía de intercambio ionico
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Las moléculas cargadas se adhieren a los intercambiadores de forma reversible de modo que dichas moléculas pueden ser asociadas o disociadas cambiando el ambiente iónico.
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Intercambiadores aniónicos en cromato de intercambio ionico
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Son portadores de grupos con cargas positivas que unen aniones de forma reversible
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Intercambioadores catiónicos en cromato de intercambio ionico
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portadores de grupos con carga negativa que unen cationes de modo reversible
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Aplicaciones de la cromato de intercambio ionico
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•medir los niveles de Hemoglobina glucosilada
•Medir porfirinas • purificar agua •producir agua desionizada •testeado cuantitativo de los electrolitos •aditivos patentados de los baños de electrochapado |
Cromatografia de exclusión
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Se basa en diferencias de tamaño, forma o carga entre las moléculas de los distintos componentes de la muestra. Lo más habitual es aprovechar las diferencias de forma y tamaño.
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¿En qué consiste la cromato de exclusión?
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una columna cromatográfica empacada con diferentes tamaños de poros o de redes de poros con el fin de que las moléculas de soluto sean retenidas o excluidas en función de forma y tamaño
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Moléculas permeables cromato exclusión
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Moléculas pequeñas que entran en el interior del relleno poroso, pasan lentamente y quedan retenidas en el poro
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Moléculas fraccionables cromato exclusión
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Moléculas intermedias que entran de manera parcial en el relleno poroso
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Moléculas excluidas cromato exclusión
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Moléculas de medida superior al poro del relleno que no entran en él y pasan rápidamente
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Aplicaciones cromato exclusión
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Purificación (proteína u otras técnicas cromatográficas)
Determinación masas moleculares |
Cromatografía por afinidad
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se basa en la unión reversible entre el analito de interés y un ligando específico, inmovilizado en un soporte sólido inerte
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Moléculas retenidas cromato por afinidad
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oléculas que se unen de manera selectiva al ligando por afinidad y las que no se unen avanzan con la fase móvil. Después, los analitos retenidos pueden ser arrastrados cambiando las condiciones de la fase móvil.
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fase estacionaria para la cromatografía de afinidad
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constituida por una matriz inerte unida covalentemente a un ligando que se une específicamente a una proteína o a un grupo de proteínas. La matriz inerte típicamente está compuesta por agarosa o poliacrilamida entrecruzada.
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Tipos de purificaión proteínas en cromato afinidad
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manera selectiva o no selectiva
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Cromato afinidad selectiva
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se usa un ligando específico para una proteína o para una etiqueta molecular unida covalentemente a la misma
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Cromato afinidad no selectiva
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el ligando se une a un grupo de proteínas con capacidad de unión similar.
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