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Caracterísiticas teoría de platos
•cuenta la forma de los picos y velocidad de movimiento.
•no cuenta el ensanchamiento de la banda.
•no indica efectos en otros parámetros.
•no indica cómo ajustar parámetros experimentales.
¿Qué considera la teoría cinética?
el ensanchamiento de las bandas por transferencia de masa durante el desplazamiento de una especie a lo largo de la columna.
Factores teoría cinética
•Difusión por turbulencia y trayectorias seguidas por la fase móvil. (A).
•Difusión longitudinal del soluto a lo largo de la columna. (B).
•Equilibrio del soluto entre las fases móvil y estacionaria no suficientemente rápida. (C) .
Columnas capilares
Tubos de gran longitud y diámetro pequeño en cuya superficie interna se fija a la fase estacionaria líquida, y se enrolla helicoidalmente en el interior del horno termostatizado
Tipos de columnas capilares
•pared revestida (WCOT)
•revestidas con soporte (SCOT)
Factores que disminuyen la eficacia de la columna
•longitud de la columna: limita las velocidades del gas.
•diámetro: resistencia que opone la fase móvil.
•tamaño de la partícula de relleno.
•temperatura columna.
•cantidad de muestra.
Absorbentes utilizados en cromatografía plana
Gel de silice (SiO2)
Gel de alumina (Al2O3)
¿A qué se debe la absorción en cromatografía plana?
A las interacciones intermoleculares (dipolo-dipolo o puentes de hidrógeno). El absorbente debe ser inerte con las sustancias.
¿Para que se utiliza la cromatografía de gases y cómo lo hace?
analizar sustancias volátiles en su fase gaseosa. Los componentes son divididos en un solvente y posteriormente vaporizados.
¿Cómo se clasifica la cromato de gases?
Por su fase estacionaria, que puede ser un sólida (GSC) o Líquida (GLC)
Gases más usados en GLC para fase móvil y características
Helio, hidrógeno, argón y nitrógeno.
debe ser inerte, seco y libre de oxígeno
Partes cromato de gases
Inyector, Horno, Columna, detector y registrador.
Aplicaciones cromato de gases y que mide
farmaceútica, cosmética y detección de toxinas. Mide presencia, pero no las representa cuantitativamente, sólo en proporción.
¿En qué se basa la separación de la muestra en cromato de líquidos?
Se basa en las interacciones de la muestra con la fase móvil o estacionaria. Los componentes se separan basados en la afinidad de cada componente.
Fase móvil cromato de líquidos
La composición se cambia para alterar las interacciones de los compuestos. El efluente es recolectado mientras se monitorean las concentraciones de los compuestos.
Fase estacionaria cromato de líquidos
Las especies individuales quedan retenidas en función de las interacciones que suceden como lo son: adsorción superficial, solubilidad y carga
Cromatografía de fase normal
fase móvil no polar y la fase estacionaria es polar (gel de sílice)
Cromatografía de fase invertida
fase móvil de naturaleza polar y fase la estacionaria no polar (cadena hidrocarbonada)
Cromatografía de intercambio iónico
Método que permite la separación de moléculas basada en sus propiedades de carga eléctrica.
Principio cromatografía de intercambio ionico
Las moléculas cargadas se adhieren a los intercambiadores de forma reversible de modo que dichas moléculas pueden ser asociadas o disociadas cambiando el ambiente iónico.
Intercambiadores aniónicos en cromato de intercambio ionico
Son portadores de grupos con cargas positivas que unen aniones de forma reversible
Intercambioadores catiónicos en cromato de intercambio ionico
portadores de grupos con carga negativa que unen cationes de modo reversible
Aplicaciones de la cromato de intercambio ionico
•medir los niveles de Hemoglobina glucosilada
•Medir porfirinas
• purificar agua
•producir agua desionizada
•testeado cuantitativo de los electrolitos
•aditivos patentados de los baños de electrochapado
Cromatografia de exclusión
Se basa en diferencias de tamaño, forma o carga entre las moléculas de los distintos componentes de la muestra. Lo más habitual es aprovechar las diferencias de forma y tamaño.
¿En qué consiste la cromato de exclusión?
una columna cromatográfica empacada con diferentes tamaños de poros o de redes de poros con el fin de que las moléculas de soluto sean retenidas o excluidas en función de forma y tamaño
Moléculas permeables cromato exclusión
Moléculas pequeñas que entran en el interior del relleno poroso, pasan lentamente y quedan retenidas en el poro
Moléculas fraccionables cromato exclusión
Moléculas intermedias que entran de manera parcial en el relleno poroso
Moléculas excluidas cromato exclusión
Moléculas de medida superior al poro del relleno que no entran en él y pasan rápidamente
Aplicaciones cromato exclusión
Purificación (proteína u otras técnicas cromatográficas)
Determinación masas moleculares
Cromatografía por afinidad
se basa en la unión reversible entre el analito de interés y un ligando específico, inmovilizado en un soporte sólido inerte
Moléculas retenidas cromato por afinidad
oléculas que se unen de manera selectiva al ligando por afinidad y las que no se unen avanzan con la fase móvil. Después, los analitos retenidos pueden ser arrastrados cambiando las condiciones de la fase móvil.
fase estacionaria para la cromatografía de afinidad
constituida por una matriz inerte unida covalentemente a un ligando que se une específicamente a una proteína o a un grupo de proteínas. La matriz inerte típicamente está compuesta por agarosa o poliacrilamida entrecruzada.
Tipos de purificaión proteínas en cromato afinidad
manera selectiva o no selectiva
Cromato afinidad selectiva
se usa un ligando específico para una proteína o para una etiqueta molecular unida covalentemente a la misma
Cromato afinidad no selectiva
el ligando se une a un grupo de proteínas con capacidad de unión similar.